A lipidek a plazmában oldhatatlanok, ezért azok lipoproteinekben szállítódnak. A lipoproteinek keletkezése, felhasználása során fellépő zavarok különféle hipo- illetve hiperlipoproteinaemiát okozhatnak.
Ha lipidek plazma koncentrációja meghaladja a metabolizmushoz szükséges mennyiséget, az erekben atherosclerosisos plakk formájában rakódnak le.
Az összkoleszterin 75%-a LDL („rossz”), 25%-a HDL („jó”).
Gyakorlat
Mintavétel
Normál és beteg szérum összkoleszterin, HDL- és triglicerid tartalmát határozzuk meg.
Polianionok és kétértékű kationok jelenlétében a VLDL és LDL frakciók csapadékot képeznek, a felülúszóban centrifugálás után maradó HDL-frakció meghatározható.
MgCl2-oldat, kicsapó reagens és vizsgálandó plazma.
A H2O2peroxidáz hatására fenollal és amino-4-antipirinnel vörös komplexet képez, ami 500 nm-en fotometrálható. [ H2O2 + fenol + amino-4-antipirin → kinonimin + 2 H2O ]
reagensek
1
2
3
4
koleszterin reagens
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
H2O
20 μl
koleszterin standard
20 μl
szérum 1
20 μl
szérum 2
20 μl
Készítünk vak oldatot(1), standard mintát(2), és két mintát a vizsgálandó szérummal (3, 4). A minták az előző táblázat szerint tartalmazzák a reagenseket.
5 percig inkubáljuk a mintákat 37 oC-on.
500 nm-en fotometráljuk a mintákat → n = 5,17, ha mmol/l
HDL-koleszterin meghatározás
Polianionok és kétértékű kationok jelenlétében a VLDL és LDL frakciók csapadékot képeznek, a felülúszóban centrifugálás után maradó HDL-frakció meghatározható.
MgCl2-oldat, kicsapó reagens és vizsgálandó plazma.
Keverés, majd centrifugálás.
Felülúszóból mikropipettával mintavétel.
reagensek
1
2
3
4
koleszterin reagens
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
H2O
20 μl
HDL standard
20 μl
szérum 1
20 μl
szérum 2
20 μl
Ugyanúgy készítünk mintákat, csak plazma helyett kicsapott felülúszót, illetve koleszterin standard helyett HDL-standardot adunk.
Eljárás ugyanaz(inkubálás, fotometrálás), a számított értéket 1,1-gyel szorozzuk a kicsapó reagens hígító hatása miatt.
Szérum trigliceridszint meghatározása
A TG-ből a lipáz hatására glicerin és zsírsavak lesznek.
A glicerin+ATP (Mg2+ és glicerin-kináz jelenlétében) glicerin-3-P + ADP lesz.
Készítünk vakot, standard mintát, normál mintát, beteg mintát (a kapott szérumok). A minták a reagenseket az előbbi táblázat szerint tartalmazzák. A minta szérum.
Eljárás az előbbiek szerint: 5 perc 37 oC-on.
Számítás az előzőek szerint, megadott n értékekkel.