Pont annyi, amennyit beleteszel.


Loading

Itt vagy: SotePedia.hu - A Semmelweis Egyetem közösségi tudástára » Semmelweis Egyetem Általános Orvostudományi Kar » Tárgyak » Molekuláris Sejtbiológia I. » Biokémia, Molekuláris- és Sejtbiológia II. (A-D) kollokvium tételsor » Szérum koleszterin- es trigliceridszintek meghatározása. Klinikai vonatkozások

Szérum koleszterin- es trigliceridszintek meghatározása. Klinikai vonatkozások

Gyakorlati jegyzet (pdf) letöltése

Elméleti háttér

  • A lipidek a plazmában oldhatatlanok, ezért azok lipoproteinekben szállítódnak. A lipoproteinek keletkezése, felhasználása során fellépő zavarok különféle hipo- illetve hiperlipoproteinaemiát okozhatnak.
  • Ha lipidek plazma koncentrációja meghaladja a metabolizmushoz szükséges mennyiséget, az erekben atherosclerosisos plakk formájában rakódnak le.
  • Az összkoleszterin 75%-a LDL („rossz”), 25%-a HDL („jó”).

Gyakorlat

Mintavétel

  • Normál és beteg szérum összkoleszterin, HDL- és triglicerid tartalmát határozzuk meg.
  • Polianionok és kétértékű kationok jelenlétében a VLDL és LDL frakciók csapadékot képeznek, a felülúszóban centrifugálás után maradó HDL-frakció meghatározható.
  1. MgCl2-oldat, kicsapó reagens és vizsgálandó plazma.
  2. Keverés, majd centrifugálás.
  3. Felülúszóból mikropipettával mintavétel.

Összkoleszterin meghatározás

  • Koleszterin-észterázzal hidrolizáljuk a koleszterin-észtereket. [ koleszterin-észter → koleszterin + ZSS ]
  • Bakteriális koleszterin oxidáz mellett ekvimoláris H2O2 keletkezik. [ koleszterin → koleszt-4-en-3-on + H2O2 ]
  • A H2O2 peroxidáz hatására fenollal és amino-4-antipirinnel vörös komplexet képez, ami 500 nm-en fotometrálható. [ H2O2 + fenol + amino-4-antipirin → kinonimin + 2 H2O ]
reagensek 1 2 3 4
koleszterin reagens 1 ml 1 ml 1 ml  1 ml
H2O 20 μl
koleszterin standard 20 μl
szérum 1 20 μl
szérum 2 20 μl
  1. Készítünk vak oldatot(1), standard mintát(2), és két mintát a vizsgálandó szérummal (3, 4). A minták az előző táblázat szerint tartalmazzák a reagenseket.
  2. 5 percig inkubáljuk a mintákat 37 oC-on.
  3. 500 nm-en fotometráljuk a mintákat → n = 5,17, ha mmol/l

HDL-koleszterin meghatározás

  • Polianionok és kétértékű kationok jelenlétében a VLDL és LDL frakciók csapadékot képeznek, a felülúszóban centrifugálás után maradó HDL-frakció meghatározható.
  1. MgCl2-oldat, kicsapó reagens és vizsgálandó plazma.
  2. Keverés, majd centrifugálás.
  3. Felülúszóból mikropipettával mintavétel.
reagensek 1 2 3 4
koleszterin reagens 1 ml 1 ml 1 ml  1 ml
H2O 20 μl
HDL standard 20 μl
szérum 1 20 μl
szérum 2 20 μl
  1. Ugyanúgy készítünk mintákat, csak plazma helyett kicsapott felülúszót, illetve koleszterin standard helyett HDL-standardot adunk.
  2. Eljárás ugyanaz(inkubálás, fotometrálás), a számított értéket 1,1-gyel szorozzuk a kicsapó reagens hígító hatása miatt.

Szérum trigliceridszint meghatározása

  • A TG-ből a lipáz hatására glicerin és zsírsavak lesznek.
  • A glicerin+ATP (Mg2+ és glicerin-kináz jelenlétében) glicerin-3-P + ADP lesz.
  • Glicerin-3-P + O2 (glicerin-3-P-oxidáz) → H2O2 + dihidroxi-aceton-P
  • H2O2 → színessé tehető, fotometrálható. [ H2O2 + 4-amino-antipirin + ESPAS → vörös kinon-származék + 4 H2O ]
    • ESPAS: N-etil-N-szulfopropil-m-anizidin
reagensek 1 2 3 4
triglicerid reagens 1 ml 1 ml 1 ml  1 ml
H2O 20 μl
triglicerid standard 20 μl
szérum 1 20 μl
szérum 2 20 μl
  1. Készítünk vakot, standard mintát, normál mintát, beteg mintát (a kapott szérumok). A minták a reagenseket az előbbi táblázat szerint tartalmazzák. A minta szérum.
  2. Eljárás az előbbiek szerint: 5 perc 37 oC-on.
  3. Számítás az előzőek szerint, megadott n értékekkel.

LDL-koleszterin meghatározása

Az előző adatok felhasználásával:


Nyomvonal: • Szérum koleszterin- es trigliceridszintek meghatározása. Klinikai vonatkozások

QR Code
QR Code Szérum koleszterin- es trigliceridszintek meghatározása. Klinikai vonatkozások (generated for current page)