Az élőlényekben a glicerinészter-hidrolázok (lipázok) hasítják a neutrális zsírokat glicerinre és zsírsavakra.
triglicerid + H2O → diglicerid + zsírsav
pancreas-lipáz
emberben a legfontosabb enzim a lipidek emésztésében
a pancreas termeli
a duodenumba jutva a trigliceridekből zsírsavakat szabadít föl.
aktív lúgos, neutrális és savas közegben is.
működését az epesavak segítik elő.
epesavak
amfipatikusak → emulgeálják a zsírokat
a lipázt direkt aktiválják → ez a hatás vizsgálható tejben (ahol a zsírok eleve finom emulzió formájában találhatók)
a gyakorlat
a lipáz aktivitását a fölszabaduló zsírsavak (gyenge savak) fenolftalein(savas: színtelen, lúgos: piros) indikátor melletti titrálásán keresztül vizsgáljuk.
anyagok
tej (2,8% zsírtartalom) (pH=7,2)
10%-os formaldehid oldat
lipáz oldat
fenolftalein
epe
0,1 N NaOH oldat
Hagedorn-csövekben készítsük össze az alábbi rendszereket
anyagok
1. rendszer
2. rendszer
tej(ml)
50
50
epe (ml)
-
2
desztillált víz (ml)
2
-
lipáz (ml)
2
2
az inkubációt (37 oC-on a lipáz hozzáadásával indítjuk.
Az inkubálás 0., 10., 20., és 40. percében mindegyik Hagedorn-csőből 10-10 ml mintát veszünk
ezeket Erlenmeyer-lombikba pipettázunk 10 ml formaldehidet és 2-3 csepp fenolftaleint adunk hozzájuk
ezt követően ezen oldatokat 0,1 N Na-hidroxiddal megtitráljuk.
A titráláshoz fogyott NaOH mennyiségét koordináta rendszerben ábrázoljuk az inkubációs idő függvényében.